Гепатопротекторное действие сиропа из плодов вакциниума превосходного

Гепатопротекторы – препараты, предназначеные для «защиты» гепатоцитов и нормализации функции печени при ее поражении, для ускорения регенерации и восстановления функциональной активности органа. Они находят применение в терапии острых, хронических гепатитов, цирроза печени и жирового гепатоза токсической, лекарственной и алкогольной этиологии [1, 3]. В настоящее время продолжаются работы по изучению дикорастущих лекарственных растений Дальнего Востока, оказывающих гепатопротекторное действие. К числу таких растений относится и красника – вакциниум превосходный (Vaccinium praestans), сем. Вересковые, не входящий в государственную фармакопею, но длительное время использующийся в народной медицине.

Ягоды красники содержат витамин С, в зрелых плодах его накапливается до 192 мг%, богаты флавоноидами, дубильными и другими биологически активными веществами. В них обнаружены органические кислоты, клетчатка, семь незаменимых аминокислот и микроэлементы (медь, кобальт, марганец, цинк и хром).

На сегодняшний день многочисленными исследованиями доказана антиоксидантная активность полифенольных соединений растительного происхождения, важнейшими из которых являются флавоноиды и антоцианы [2, 4].

Цель настоящей работы – анализ гепатопротекторной активности сиропа из плодов вакциниума превосходного на модели патологии печени. Материал и методы. Эксперимент выполнен на 45 крысах-самцах линии Вистар массой 180–200 г. Животных содержали в стандартных условиях светового режима и пищевом рационе с соблюдением всех правил Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (Страсбург,1986). Крысы были разделены на три группы по 15 особей в каждой:
1-я группа – интактные животные;
2-я группа – контроль: модель токсического гепатита;
3-я группа – опыт: модель токсического гепатита на фоне применения сиропа из плодов красники.
Модель токсического гепатита создавали путем однократного введения в желудок тетрахлорметана в дозе 4 мл/кг в растворе на оливковом масле в соответствии с «Методическими указаниями по изучению гепатозащитной активности фармакологических средств» [1, 6]. Сироп, приготовленный на минеральной воде, вводили в рекомендуемой дозе (0,43 мл/кг) животным 3-й группы в желудок за 7 дней до и через 5 дней после моделирования токсического гепатита. Крысы 2-й группы вместо сиропа получали эквиобъемное количество растворителя.

Исследования проводили после декапитации животных под эфирным наркозом. Вычисляли относительную массу печени (вес органа в миллиграммах к массе тела в граммах), определяли биохимические показатели сыворотки крови: активность аланиламинотрансферазы (АлАТ) и аспартааминотрансферазы (АсАТ), уровни холестерина, триглицеридов и др. В гомогенатах печени для анализа антиоксидантной активности определяли концентрацию продукта деградации жирных кислот – малонового диальдегида (МДА) и интегральную антирадикальную активность (ИАА) в эквивалентах Trolox.

Изучение биохимических показателей осуществлялось при помощи анализатора ВС-200 «Миндрест». Содержание МДА вычисляли по цветной реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой на спектрофотометре Shimadzu UV-1650 PC [9]. На этом же приборе с термостатированной ячейкой оценивалась ИАА [8].

Морфология печени после фиксации ее фрагментов в 10 %-ном нейтральном формалине, парафиновой проводки и изготовления гистологических препаратов описывалась на кафедре патологической анатомии, судебно-медицинской экспертизы и права ТГМУ. Полученные результаты подвергали статистической обработке с использованием метода вариационных рядов и критерия Стьюдента.

Результаты исследования. При гистологическом исследовании у животных 2-й группы зарегистрированы признаки тяжелого токсического поражения печени: белковая дистрофия гепатоцитов и внутриклеточный холестаз, внутридольковые некрозы, занимавшие до 30 % площади срезов, активация клеток Купфера, слабовыраженная эозинофильная инфильтрация портальных трактов. В 3-й группе внутридольковые некрозы гепатоцитов занимали не более 10–20 % площади срезов, явления холестаза и активация клеток Купфера были выражены умеренно.

У крыс 2-й группы отмечалось статистически достоверное увеличение массы печени (на 65 %) по сравнению с интактными животными. Уровень МДА после введения CCl 4 повышался в 2 раза, а показатель суммарной антирадикальной активности уменьшался на 51 %. Активность АлАТ и АсАТ в сыворотке крови животных 2-й группы увеличивалась в 1,9 раза. На фоне использования сиропа интенсивность образования МДА значимо уменьшалась, в сыворотке крови снижалась активность трансаминаз. Уровни триглицеридов и холестерина при введении сиропа существенно не изменялись, остальные биохимические показатели (общий белок, общий билирубин, мочевина) в опыте и контроле достоверно не различались (табл. 1, 2).

Таблица 1
Влияние сиропа красники на массу печени, содержание МДА и ИАА в гомогенатах печени после введения CC1 4 (M±m)

¹ Разница с 1-й группой статистически значима.
² Разница со 2-й группой статистически значима.

Таблица 2
Влияние сиропа красники на биохимические показатели сыворотки крови после введения CC1 4 (M±m)

¹ Разница с 1-й группой статистически значима.
² Разница со 2-й группой статистически значима.

Обсуждение полученных данных. Гепатопротекторы существенно не влияют на здоровую печень, их терапевтический эффект проявляется только при заболеваниях данного органа [7]. Введение сиропа красники нормализовало относительную массу печени и активность трансаминаз в сыворотке крови, ослабляло явления холестаза, улучшало гистологические характеристики органа у крыс с токсическим гепатитом. Положительная динамика АлАТ и АсАТ свидетельствовала о замедлении процессов цитолиза [3].

Исследуемый сироп при экспериментальном токсическом поражении печени за счет содержащихся в нем полифенольных соединений проявлял свойства эффективного антиоксиданта: препятствовал накоплению вторичных продуктов липопероксидации, активировал функцию естественной антиокислительной защиты. При взаимодействии свободных радикалов с флавоноидами образовывались радикалы, неспособные продолжать свободнорадикальный процесс [5].

Таким образом, результаты эксперимента свидетельствуют о снижении интенсивности свободнорадикального окисления, об уменьшении явлений цитолиза и воспалительных изменений в печени при введении исследуемого фитопрепарата, приготовленного на минеральной воде в виде сиропа, что связано с наличием комплекса биологически активных веществ, входящих в состав Vaccinium praestans. Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием использования сиропа из вакциниума превосходного в качестве профилактического или вспомогательного лечебного средства при заболеваниях печени.

Резюме. К числу растений, оказывающих гепатопротекторное действие, относится красника  – вакциниум превосходный (Vac­ci­ni­um praestans). В эксперименте на крысах-самцах линии Wistar введением тетрахлорметана моделировали токсический гепатит и изучали показатели поражения печени на фоне энтерального приема сиропа из плодов красники. Результаты исследования свидетельствуют о снижении интенсивности свободнорадикального окисления, об уменьшении явлений цитолиза и воспалительных изменений в печени при введении исследуемого фитопрепарата, что обосновывает использование сиропа из Vaccinium praestans в качестве профилактического или вспомогательного средства при заболеваниях печени.
Ключевые слова: Vaccinium praestans, красника, токсический гепатит, антиоксидантная активность.

Литература.
1. Венгеровский А.И. Методические указания по изучению гепатозащитной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М.: Ремедиум. 2000. С. 228–231.
2. Зорикова С.П., Короткова И.П., Зориков П.С. Ранозаживляющая активность растений, содержащих флавоноиды // Естественные и технические науки. 2010. No 3. С. 152–160.
3. Клинико-морфологические и иммунологические аспекты парентеральных гепатитов / Каминский Ю.В., Скляр Л.Ф., Полушин О.Г. и др. Владивосток: Медицина ДВ, 2005. 84 с.
4. Куракин В.А., Кулагин О.Л., Додонов Н.С. и др. Антиоксидантная активность некоторых тонизирующих и гепатопротекторных фитопрепаратов, содержащих флавоноиды и фенилпропаноиды // Растительные ресурсы. 2008. Т. 44, No 1. С. 122–130.
5. Маняхин А.Ю., Зорикова С.П., Зорикова О. Г. Биологическая активность сухого экстракта шлемника байкальского // Тихоокеанский мед. журнал. 2010. No 2. С. 66–69.
6. Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP): руководящий нормативный документ. М.: Медицина, 1992. 78с.
7. Саратиков А.С., Венгеровский А.И., Чучалин В.С. Экстракт солянки холмовой (лохеин) – эффективная защита печени. Томск: STT, 2000. 113 с.
8. Bartosz G., Janaszewska A., Ertel D., Bartosz M. Simpe determination of peroxyl radical-trapping capacity // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. Vol. 46. P. 519–528,
9. Buege J.A., Aust S.D. Microsomal lipid peroxidation // Methods in Enzymology / eds. by Fleischer S., Packer L. New York: Academic Press, 1978. P. 302–310.